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Altering Fish Embryos with Aquaporin-3: An Essential Step Toward Sucessful Cryopreservation
(M. Hagedorn et al.)

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Título original: Altering Fish Embryos with Aquaporin-3: An Essential Step Toward Successful Cryopreservation.
Autores: M. Hagedorn, S.L. Lance, D.M. Fonseca, F.W. Kleinhans, D. Artimov, R. Fleischer, A.T.M.S. Hoque, M.B. Hamilton, and B.S. Pukazhenthi.
Abstract original:
Fish populations are globally threatened by overharvesting and habitat degradation. The ability to bank fish embryos by cryopreservation could be crucial for preserving species diversity, for aquaculture (allowing circannual fish farming), and for managing fish models used in human biomedical research. However, no nonmammalian embryo has ever been successfully cryopreserved. For fish, low membrane permeability prevents cryoprotectants from entering the yolk to prevent cryodamage. Here, we present evidence of a membrane mechanism hindering cryopreservation of fish and propose a novel solution to this obstacle. Zebrafish (Danio rerio) embryos have rectifying membranes that allow water to leave but not to reenter readily. This feature may be an evolutionary trait that allows freshwater embryos to grow in hypoosmotic environments without osmoregulatory organs. However, this trait may also prevent successful fish embryo cryopreservation because both water and cryoprotectants must move into and out of cells. As a solution, we injected zebrafish embryos with mRNA for the aquaporin-3 water channel protein and demonstrated increased membrane permeability to water and to a cryoprotectant. Modeling indicates that sufficient cryoprotectant enters aquaporin-3-expressing zebrafish embryos to allow cryopreservation.
Tradução:

Título: Alteração de embriões de peixes com aquaporina-3: um passo essencial perante uma criopreservação eficaz.

Resumo:

As populações de peixes são globalmente ameaçadas, devido à sobrepesca e degradação do habitat. A habilidade de armazenar embriões de peixes, através da criopreservação, pode ser crucial para preservar a diversidade de espécies, para a aquacultura (permitindo a criação circanual de peixes), e para manipular modelos de peixes utilizados em investigação biomédica humana. Contudo, até agora, nenhum embrião de mamífero foi criopreservado com sucesso. Nos peixes, a baixa permeabilidade membranar, previne os crioprotectores de entrar no vitelo, de modo a que não possam prevenir danos causados pela crioprotecção. Neste artigo, demonstramos evidências de um mecanismo membranar que impede a criopreservação de peixes, e propomos uma solução para este obstáculo. Embriões de peixe-zebra (Danio rerio) apresentam membranas rectificantes, que permitem prontamente a saída de água mas não a reentrada. Esta característica é um traço evolucionário, que permite o crescimento de embriões de água doce em meios hiposmóticos, sem órgãos osmoregulatórios. Contudo, este traço poderá prevenir o sucesso na criopreservação de embriões de peixes, porque ambos água e crioprotectores deverão movimentar-se para dentro e fora das células. Como solução, microinjectamos os peixes-zebra com mRNA para o canal proteico de água aquaporina-3, e demonstramos o aumento da permeabilidade à agua e a um crioprotector. A Modelação indica que uma quantidade suficiente de crioprotector entra nos embriões de peixes-zebra que expressam a aquaporina-3, de modo a permitir a criopreservação.



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